病原體檢測(cè)試劑盒操作的幾大要點(diǎn)須知

　　病原體檢測(cè)試劑盒是一種經(jīng)典的利用DNA熒光染色法檢測(cè)支原體污染的試劑盒，其原理是當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，染色質(zhì)會(huì)固縮，Hoechst染色后在熒光顯微鏡下觀察，正常細(xì)胞的細(xì)胞核呈正常的藍(lán)色，而凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核會(huì)呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染，顏色有些發(fā)白。
 
　　病原體檢測(cè)試劑盒操作步驟：
　　（一）貼壁細(xì)胞
　　1、將蓋玻片置于6孔板或其他培養(yǎng)皿內(nèi)，接種細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)夜，使融合率約為50%~80%。
　　2、加入干預(yù)條件使細(xì)胞發(fā)生凋亡后，吸盡培養(yǎng)液，加入Hoechst固定液。
　　3、去除固定液，用PBS或生理鹽水洗2次。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)。
　　4、加入Hoechst 染色液，孵育。也宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。
　　5、棄染色液，PBS或生理鹽水洗2次，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)。
　　6、滴一滴抗熒封片劑于載玻片上，蓋上貼有細(xì)胞的蓋玻片，避免氣泡。
　　（二）懸浮細(xì)胞
　　1、加入Hoechst固定液，緩緩懇起細(xì)胞，固定10min或更長(zhǎng)時(shí)間（亦可4℃過(guò)夜）。
　　2、低速離心去除固定液，用PBS 或生理鹽水洗2次。洗滌時(shí)手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。
　　4、稍晾干，使細(xì)胞貼在載玻片上不易隨液體流動(dòng)。
　　5、均勻滴上Hoechst染色液。用吸水紙從邊緣吸去液體，微晾干。
　　6、棄染色液，用PBS或生理鹽水洗2次，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床手動(dòng)。
　　7、滴一滴抗熒光封片劑于載玻片上，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。
　　8、熒光顯微鏡可檢測(cè)到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。
　　（三）組織切片
　　1、常規(guī)包埋切片。用PBS 或生理鹽水洗2次。洗滌時(shí)手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。
　　2、均勻滴上Hoechst染色液。.
　　3、棄染色液，PBS或生理鹽水洗2次，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床或手動(dòng)。
　　4、將切片置于載玻片上，滴一滴抗熒光封片劑，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。
　　5、熒光顯微鏡可檢測(cè)到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。激發(fā)波長(zhǎng)350nm左右，發(fā)射波長(zhǎng)460nm左右。